nba篮彩DGGECGGE及T 比较

发布时间:2020-08-12 11:24

  DGGE,CGGE及TGGE三种方法是基于相同的原理而设计的突变检测方法,它仍均是根据DNA的解链特性而设计.对于同一定序列组成或的DNA片段来说,它具有恒定的解链温度(Tm),但若其序列发生改变时,Tm值亦发生改变,在含有变性因素(变性剂, 高温)的凝胶半进行电泳,当其比链解开形成分叉时,nba篮彩,电泳迁移的速度就会改变.Tm值 全要取决于DNA的碱基组成,序列中出现单碱基替换时,Tm亦发生改变,电泳迁移率 亦改变,此即DGGE,CDGE及TGGE鉴定突变的技术基础.

  DGGE是检测基因突变故为精确的方法,它不仅可检测单一片段的单点突变,对多 点突变的检测亦较容易,该方法与PCR技术相结合,使其能非常快速的对大量标本进 行分析.

  对于一DNA片段来说,其Tm值与基碱基组或有关,当其碱基组成发生变化时,Tm 值亦改变,因此,对于突变的片段来说,若其在一变性物质线性梯度增加的凝胶上进 行电泳时,随着变性剂浓度的增加,当这种浓度达一定值时突变的DNA片段发生解链 而形成分叉,其电泳迁移速度变慢.因此突变的DNA片段与正常的DNA片段电泳的迁移 位置有差别,研究证明DGGE可检出任何粪型的单碱基取代,如果将突变型与正常的 DNA片段形成异源双链时,其敏感性大大提高.

  CDGE是DGGE基础上发展起来的基因突变检测技术,亦是利用突变基因与正常基因 片段间Tm值的差异来检测突变的方法,该方法与DGGE的区别在于聚丙烯酰胺中的含的 变性剂浓度相当于含突变基因片段的Tm值,而且浓度恒定,而不是线性递增.为了提 高DGGE和CDGE的检测敏感性,通常在一侧引物的5端设计一含GC的区域(GC-ClampGC 钳),避免了DNA的完全解链,从而提高了突变的检出率,可达100%.

  该方法是将PCR扩增的产物量一中性聚丙烯酰胺凝胶上,在一温度线性梯度上升 的电场中进行电泳,当DNA双链到达其Tm时,双链解开,形成分叉,而影响电泳迁移 率,突变的扩增产物其Tm值与野先型有明显不同,因而有不同的解链区,从而造成电 泳迁移效率的差别,据此可判断检材中DNA有无突变.

  由于DGGE及TGGE能区分不同DNA的碱基构成, 所以也越来越多地运用到分析环境中微生物的群落结构。

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